Научно-практический медицинский рецензируемый журналISSN 1727-2378
Ru
En

Особенности спонтанной и индуцированной хемилюминесценции нейтрофильных гранулоцитов у больных механической желтухой злокачественного генеза

Библиографическая ссылка: Смирнова О. В., Каспаров Э. В., Цуканов В. В., Титова Н. М., Губанов Б. Г., Эверт Л. С. Особенности спонтанной и индуцированной хемилюминесценции нейтрофильных гранулоцитов у больных механической желтухой злокачественного генеза // Доктор.Ру. 2018. № 3 (147). С. 8–11.
Особенности спонтанной и индуцированной хемилюминесценции нейтрофильных гранулоцитов у больных механической желтухой злокачественного генеза
20 Марта 11:52

Цель исследования: изучение спонтанной и индуцированной хемилюминесцентной активности нейтрофильных гранулоцитов (НГ) у больных механической желтухой (МЖ) злокачественного генеза в зависимости от уровня билирубина.

Дизайн: открытое сравнительное (контролируемое) проспективное исследование.

Материалы и методы: в исследование вошли 42 больных МЖ злокачественного генеза и 100 практически здоровых добровольцев, сопоставимых с ними по полу и возрасту. В качестве методов изучения активности НГ использовали хемилюминесцентный анализ спонтанной и индуцированной продукции активных форм кислорода и статистический анализ.

Результаты: у больных МЖ злокачественного генеза вне зависимости от содержания билирубина происходят увеличение площади под кривыми спонтанной и индуцированной хемилюминесценции и снижение максимальных значений их интенсивности по сравнению с практически здоровыми людьми. Время выхода на максимум индуцированного свечения было повышено в группах больных МЖ злокачественного генеза с уровнем билирубина до 60 мкмоль/л и более 200 мкмоль/л до операции по сравнению с контрольной группой и уменьшено в группе пациентов с концентрацией билирубина 60–200 мкмоль/л. Индекс активации был увеличен у всех больных МЖ по сравнению с контрольной группой, но при этом у лиц с уровнем билирубина более 200 мкмоль/л он был значимо выше, чем у больных с содержанием билирубина 60–200 мкмоль/л.

Заключение: у пациентов с МЖ злокачественного генеза наблюдалось снижение хемилюминесцентной активности НГ, вероятно, обусловленное токсическим влиянием билирубина и злокачественного опухолевого фактора. Низкая хемилюминесцентная активность НГ свидетельствует о неэффективном неспецифическом иммунном ответе, подтверждая, что в патогенезе МЖ злокачественного генеза наряду с токсическими, опухолевыми и другими факторами большую роль играет угнетение функции клеток иммунной системы.

Смирнова Ольга Валентиновна — д. м. н., заведующая лабораторией клинической патофизиологии НИИ МПС ФГБУН ФИЦ КНЦ СО РАН; профессор кафедры медицинской биологии Института фундаментальной биологии и биотехнологии ФГАОУ ВО СФУ. 660041, г. Красноярск, пр. Свободный, д. 79. E­mail: ovsmirnova71@mail.ru 

Каспаров Эдуард Вильямович — д. м. н., профессор, директор НИИ МПС ФГБУН ФИЦ КНЦ СО РАН. 660022, г. Красноярск, ул. Партизана Железняка, д. 3Г. E­mail: impn@impn.ru 

Цуканов Владислав Владимирович — д. м. н., профессор, заведующий клиническим отделением патологии пищеварительной системы у взрослых НИИ МПС ФГБНУ ФИЦ КНЦ СО РАН. 660022, г. Красноярск, ул. Партизана Железняка, д. 3Г. E­mail: gastro@impn.ru 

Губанов Борис Геннадьевич — научный сотрудник лаборатории клинической патофизиологии НИИ МПС ФГБУН ФИЦ КНЦ СО РАН. 660022, г. Красноярск, ул. Партизана Железняка, д. 3Г. E­mail: boriss.kr@mail.ru 

Титова Надежда Митрофановна — к. б. н., профессор кафедры медицинской биологии Института фундаментальной биологии и биотехнологии ФГАОУ ВО СФУ. 660041, г. Красноярск, пр. Свободный, д. 79. E­mail: tinami6@mail.ru 

Эверт Лидия Семеновна — д. м. н., главный научный сотрудник НИИ МПС ФГБУН ФИЦ КНЦ СО РАН. 660022, г. Красноярск, ул. Партизана Железняка, д. 3Г. E­mail: lidiya_evert@mail.ru

Механическая желтуха (МЖ) злокачественного генеза — тяжелое патологическое состояние, возникающее в результате обструкции желчевыводящих путей злокачественной опухолью и сопровождающееся увеличением уровня билирубина с развитием эндотоксикоза и печеночно­клеточной недостаточности [1, 2]. Вероятность возникновения тяжелых осложнений при данном заболевании напрямую зависит от уровня билирубина [3–5]. Согласно классификации Гальперина, больные МЖ делятся на три группы: с уровнем билирубина менее 60 мкмоль/л, 60–200 мкмоль/л и более 200 мкмоль/л, при этом на тяжесть течения оказывают влияние активность трансаминаз, уровень общего белка, наличие опухолевого фактора [6].

В области обструкции печеночных протоков развивается воспаление. Нейтрофильные гранулоциты (НГ), являясь неспецифическими фагоцитами, первыми устремляются в пораженную область с целью элиминации патогенов [7–10]. Изучение хемилюминесцентной активности НГ позволяет оценить их функциональную способность в элиминации бактериальных и других агентов, что является чрезвычайно важным в практической гастроэнтерологии.

Высокая хемилюминесцентная активность нейтрофилов при воспалительных заболеваниях ЖКТ позволяет предположить эффективный неспецифический ответ клеток иммунной системы, направленный на эрадикацию патологического агента. С другой стороны, низкая активность неспецифических фагоцитов будет способствовать персистенции возбудителя, первращая острый воспалительный процесс в длительный и хронический. Целью настоящего исследования явилось изучение спонтанной и индуцированной хемилюминесцентной активности НГ у больных МЖ злокачественного генеза в зависимости от уровня билирубина.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
В исследование вошли 42 больных МЖ злокачественного генеза, их средний возраст составил 64,02 ± 14,88 года. Этиологией МЖ был рак головки поджелудочной железы, желчного пузыря, желудка с множественными метастазами [11–17]. Отбор больных производился методом случайной выборки по мере поступления в первое хирургическое отделение КГБУЗ «Красноярская межрайонная клиническая больница скорой медицинской помощи имени Н. С. Карповича» в 2013–2015 гг. При поступлении врачами­хирургами приемного отделения по сочетанию эпидемиологических, клинических и диагностических признаков устанавливался диагноз синдрома МЖ.

В зависимости от уровня билирубина пациенты были разделены на тир группы: с уровнем билирубина менее 60 мкмоль/л (5 человек), 60–200 мкмоль/л (20 человек), выше 200 мкмоль/л (17 человек). В качестве контрольной группы взяты 100 практически здоровых добровольцев, сопоставимых по полу и возрасту с обследованными больными.

Материалом исследования стала венозная кровь, которая забиралась у лиц контрольной группы и пациентов утром натощак в пробирки с гепарином до начала патогенетической терапии.

В качестве метода изучения активности НГ использовался хемилюминесцентный анализ спонтанной и индуцированной продукции активных форм кислорода [10, 18–20]. Оценку спонтанной и индуцированной хемилюминесценции осуществляли в течение 90 минут на 36­канальном хемилюминесцентном анализаторе CL­3607 (Россия). Определялись следующие параметры: время выхода кривой на максимум интенсивности хемилюминесценции, максимальное значение интенсивности и площадь под кривой хемилюминесценции. В качестве ее усилителя использовали люминол. Индуктором респираторного взрыва служил опсонизированный зимозан. Усиление хемилюминесценции, индуцированной опсонизированным зимозаном, оценивали по соотношению площади индуцированной к площади спонтанной хемилюминесценции и обозначали индексом активации.

По результатам исследования на персональном компьютере в пакете электронных таблиц Microsoft Excel 2010 была сформирована база данных. Статистическая обработка данных проводилась с помощью пакетов прикладных программ Statistica for Windows 8.0 (StatSoft Inc., США, 2008) и Microsoft Excel 2007 (Microsoft, США). Обработка включала подсчет непараметрических данных: медианы (Me) и процентилей (С25–С75). Статистическую значимость различий определяли с использованием рангового критерия Манна — Уитни. Критический уровень значимости при проверке статистических гипотез принимался равным р < 0,05.

РЕЗУЛЬТАТЫ
У больных МЖ злокачественного генеза время выхода на максимум интенсивности и площадь под кривой спонтанной хемилюминесценции увеличены по сравнению с практически здоровыми людьми до начала патогенетического лечения (табл. 1). Время выхода на максимум интенсивности индуцированного зимозаном свечения НГ у больных МЖ злокачественного генеза уменьшалось по сравнению с контрольной группой, при этом площадь под кривой индуцированной хемилюминесценции НГ была увеличена. Индекс активации у больных МЖ повышен по сравнению с контрольной группой.

Таблица 1
Особенности хемилюминесцентной активности нейтрофильных гранулоцитов у больных механической желтухой злокачественного генеза (Ме, С25–С75)
1_1.jpg 
Примечание. Здесь и в таблице 2: Tmax — время выхода кривой на максимум интенсивности хемилюминесценции, Imax — максимальное значение интенсивности хемилюминесценции, S — площадь под кривой хемилюминесценции.

У пациентов время максимального значения спонтанной хемилюминесценции нейтрофилов составило 433 (238–1183) с, индуцированной — 328 (212–573) с.

При делении больных МЖ злокачественного генеза в зависимости от уровня билирубина в крови были получены следующие результаты: вне зависимости от содержания билирубина происходит увеличение площади под кривыми спонтанной и индуцированной хемилюминесценции и снижение максимальных значений их интенсивности по сравнению с практически здоровыми людьми (табл. 2).

Таблица 2
Показатели хемилюминесцентной активности нейтрофильных гранулоцитов у больных механической желтухой злокачественного генеза в зависимости от уровня билирубина (Ме, С25–С75)
1_2.jpg
Время выхода на максимум индуцированного свечения было повышено в группах больных МЖ злокачественного генеза с уровнем билирубина до 60 мкмоль/л и более 200 мкмоль/л до операции по сравнению с контрольной группой и уменьшено в группе пациентов с концентрацией билирубина 60–200 мкмоль/л.

Индекс активации был увеличен у всех больных МЖ злокачественного генеза по сравнению с контрольной группой, но при этом у лиц с уровнем билирубина более 200 мкмоль/л он был значимо повышен по сравнению с больными с содержанием билирубина 60–200 мкмоль/л.
Длительность максимального значения интенсивности спонтанной хемилюминесценции у больных МЖ с уровнем билирубина менее 60 мкмоль/л составила 563 (276–879) с, индуцированной — 551 (541–1121) с, при 60–200 мкмоль/л — 354 (251–664) с и 301 (213–471) с, при более 200 мкмоль/л — 1301 (294–1499) с и 341 (213–780) с.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ
У пациентов с механической желтухой (МЖ) злокачественного генеза наблюдалось снижение хемилюминесцентной активности нейтрофильных гранулоцитов (НГ), вероятно, обусловленное токсическим влиянием билирубина и злокачественного опухолевого фактора. Выявлены показатели, которые напрямую зависят от содержания билирубина: время выхода на максимум, площадь под кривой индуцированной хемилюминесценции и индекс активации. Низкая хемилюминесцентная активность НГ свидетельствует о неэффективном неспецифическом иммунном ответе, подтверждая, что в патогенезе МЖ злокачественного генеза наряду с токсическими, опухолевыми и другими факторами большую роль играет угнетение функции клеток иммунной системы. 

Особенности спонтанной и индуцированной хемилюминесценции нейтрофильных гранулоцитов у больных механической желтухой злокачественного генеза
20 Марта 11:52
ЛИТЕРАТУРА
  1. Натальский А. А., Тарасенко С. В., Зайцев О. В., Песков О. Д. Оценка качества жизни у больных с синдромом механической желтухи. Сиб. мед. журн. 2014; 126(3): 51–4. [Natal'skii A. A., Tarasenko S. V., Zaitsev O. V., Peskov O. D. Otsenka kachestva zhizni u bol'nykh s sindromom mekhanicheskoi zheltukhi. Sib. med. zhurn. 2014; 126(3): 51–4. (in Russian)]
  2. Попова Ю. А. Болезни печени и желчного пузыря. Диагностика, лечение, профилактика. СПб.: Крылов; 2008. 192 с. [Popova Yu. A. Bolezni pecheni i zhelchnogo puzyrya. Diagnostika, lechenie, profilaktika. SPb.: Krylov; 2008. 192 s. (in Russian)]
  3. Герасимов А. В., Розен В. В., Давыдова О. В. Результаты применения чрескожных чреспеченочных вмешательств у больных механической желтухой и холангитом. Бюлл. мед. интернет­конференций. 2013; 3(3): 505–6. [Gerasimov A. V., Rozen V. V., Davydova O. V. Rezul'taty primeneniya chreskozhnykh chrespechenochnykh vmeshatel'stv u bol'nykh mekhanicheskoi zheltukhoi i kholangitom. Byull. med. internet­konferentsii. 2013; 3(3): 505–6. (in Russian)]
  4. Смирнова О. В., Титова Н. М., Манчук В. Т., Елманова Н. Г. Особенности цитокиновой регуляции у больных механической желтухой различного генеза. Соврем. проблемы науки и образования. 2015; 4: 425. [Смирнова О. В., Титова Н. М., Манчук В. Т., Елманова Н. Г. Особенности цитокиновой регуляции у больных механической желтухой различного генеза. Соврем. проблемы науки и образования. 2015; 4: 425. (in Russian)]
  5. Смирнова О. В., Титова Н. М., Манчук В. Т., Елманова Н. Г., Кочетова Л. В., Пахомова Р. А. Особенности клеточного звена иммунитета у больных механической желтухой доброкачественного генеза в зависимости от уровня билирубина. Фундаментальные исследования. 2015; 2–10: 2174–9. [Смирнова О. В., Титова Н. М., Манчук В. Т., Елманова Н. Г., Кочетова Л. В., Пахомова Р. А. Особенности клеточного звена иммунитета у больных механической желтухой доброкачественного генеза в зависимости от уровня билирубина. Фундаментальные исследования. 2015; 2–10: 2174–9. (in Russian)]
  6. Гальперин Э. И., Момунова О. Н. Классификация тяжести механической желтухи. Хирургия. Журн. им. Н. И. Пирогова. 2014; 1: 5–9. [Gal'perin E. I., Momunova O. N. Klassifikatsiya tyazhesti mekhanicheskoi zheltukhi. Khirurgiya. Zhurn. im. N. I. Pirogova. 2014; 1: 5–9. (in Russian)]
  7. Александров Л. В., Ачкасов Е. Е., Негребов М. Г. Нарушение трофического статуса и его коррекция у больных с механической желтухой, обусловленной желчнокаменной болезнью. Моск. хирург. журн. 2010; 1: 27–31. [Aleksandrov L. V., Achkasov E. E., Negrebov M. G. Narushenie troficheskogo statusa i ego korrektsiya u bol'nykh s mekhanicheskoi zheltukhoi, obuslovlennoi zhelchnokamennoi bolezn'yu. Mosk. khirurg. zhurn. 2010; 1: 27–31. (in Russian)]
  8. Баширов А. Б., Алибеков А. Е. Иммунокоррекция при хирургическом лечении механической желтухи. В кн.: Сборник тезисов докладов III Конгресса ассоциации хирургов им. Н. И. Пирогова. М.; 2006: 181–2. [Bashirov A. B., Alibekov A. E. Immunokorrektsiya pri khirurgicheskom lechenii mekhanicheskoi zheltukhi. V kn.: Sbornik tezisov dokladov III Kongressa assotsiatsii khirurgov im. N. I. Pirogova. M.; 2006: 181–2. (in Russian)]
  9. Ступин В. А., Лаптев В. В., Цкаев А. Ю., Гивировская Н. Е. Изменения и коррекция показателей иммунной системы при механической желтухе доброкачественного генеза. Анн. хирург. гепатологии. 2008; 13(2): 69–75. [Stupin V. A., Laptev V. V., Tskaev A. Yu., Givirovskaya N. E. Izmeneniya i korrektsiya pokazatelei immunnoi sistemy pri mekhanicheskoi zheltukhe dobrokachestvennogo geneza. Ann. khirurg. gepatologii. 2008; 13(2): 69–75. (in Russian)]
  10. Смирнова О. В., Титова Н. М., Каспаров Э. В., Елманова Н. Г. Хемилюминесцентная активность нейтрофильных гранулоцитов в прогрессировании механической желтухи в зависимости от уровня билирубина и генеза желтухи. Мед. иммунология. 2016; 18(3): 269–78. [Smirnova O. V., Titova N. M., Kasparov E. V., Elmanova N. G. Khemilyuminestsentnaya aktivnost' neitrofil'nykh granulotsitov v progressirovanii mekhanicheskoi zheltukhi v zavisimosti ot urovnya bilirubina i geneza zheltukhi. Med. immunologiya. 2016; 18(3): 269–78. (in Russian)]
  11. Кубачев К. Г., Борисов А. Е., Кочнев В. В. Осложненный рак панкреатодуоденальной зоны. Анн. хирург. гепатологии. 2007; 12(3): 80–1. [Kubachev K. G., Borisov A. E., Kochnev V. V. Oslozhnennyi rak pankreatoduodenal'noi zony. Ann. khirurg. gepatologii. 2007; 12(3): 80–1. (in Russian)]
  12. Кубышкин В. А., Щеголев А. И., Балукова О. В., Кочатков А. В. Отдаленные результаты лечения протоковой аденокарциномы головки поджелудочной железы: факторы, влияющие на прогноз течения заболевания. Анн. хирург. гепатологии. 2004; 9(1): 129–34. [Kubyshkin V. A., Shchegolev A. I., Balukova O. V., Kochatkov A. V. Otdalennye rezul'taty lecheniya protokovoi adenokartsinomy golovki podzheludochnoi zhelezy: faktory, vliyayushchie na prognoz techeniya zabolevaniya. Ann. khirurg. gepatologii. 2004; 9(1): 129–34. (in Russian)]
  13. Masuda N., Shiraishi Y., Okubo K., Okada T., Segawa T., Takada M. et al. A case report of renal cell carcinoma with metastatic intraductal tumor thrombus of the common bile duct. Hinyokika Kiyo. 2009; 55(2): 99–102.
  14. Chotirosniramit A., Liwattanakun A., Lapisatepun W., Ko­Iam W., Sandhu T., Junrungsee S. A single institution report of 19 hepatocellular carcinoma patients with bile duct tumor thrombus. J. Hepatocell Carcinoma. 2017; 4: 41–7.
  15. An J., Lee K. S., Kim K. M., Park D. H., Lee S. S., Lee D. et al. Clinical features and outcomes of patients with hepatocellular carcinoma complicated with bile duct invasion. Clin. Mol. Hepatol. 2017; 23(2): 160–9.
  16. Migita K., Watanabe A., Yoshioka T., Kinoshita S., Ohyama T. Clinical outcome of malignant biliary obstruction caused by metastatic gastric cancer. World J. Surgery. 2009; 33(11): 2396–402.
  17. De Silva W. S., Pathirana A. A., Prematilleke I., Rajapakse S. A., Hettiarachchi P. S., Manawasinghe D. S. et al. Two synchronous malignant tumors of the pancreas: a case report. J. Med. Case Rep. 2017; 11(1): 84.
  18. Савченко А. А., Гвоздев И. И., Борисов А. Г., Черданцев Д. В., Первова О. В., Кудрявцев И. В. и др. Особенности фагоцитарной активности и состояния респираторного взрыва нейтрофилов крови у больных распространенным гнойным перитонитом в динамике послеоперационного периода. Инфекция и иммунитет. 2017; 7(1): 51–60. [Savchenko A. A., Gvozdev I. I., Borisov A. G., Cherdantsev D. V., Pervova O. V., Kudryavtsev I. V. i dr. Osobennosti fagotsitarnoi aktivnosti i sostoyaniya respiratornogo vzryva neitrofilov krovi u bol'nykh rasprostranennym gnoinym peritonitom v dinamike posleoperatsionnogo perioda. Infektsiya i immunitet. 2017; 7(1): 51–60. (in Russian)]
  19. Гринштейн И. Ю., Савченко А. А., Гринштейн Ю. И., Гвоздев И. И., Петрова М. М. Особенности респираторного взрыва и метаболизма нейтрофилов крови у больных с разной чувствительностью к ацетилсалициловой кислоте при остром коронарном синдроме. Тихоокеанский мед. журн. 2016; 61(4): 61–5. [Grinshtein I. Yu., Savchenko A. A., Grinshtein Yu. I., Gvozdev I. I., Petrova M. M. Osobennosti respiratornogo vzryva i metabolizma neitrofilov krovi u bol'nykh s raznoi chuvstvitel'nost'yu k atsetilsalitsilovoi kislote pri ostrom koronarnom sindrome. Tikhookeanskii med. zhurn. 2016; 61(4): 61–5. (in Russian)]
  20. Смирнова О. В., Титова Н. М., Елманова Н. Г. Особенности хемилюминесцентной активности нейтрофильных гранулоцитов больных механической желтухой доброкачественного генеза. Рос. иммунол. журн. 2015; 9(2): 313–15. [Smirnova O. V., Titova N. M., Elmanova N. G. Osobennosti khemilyuminestsentnoi aktivnosti neitrofil'nykh granulotsitov bol'nykh mekhanicheskoi zheltukhoi dobrokachestvennogo geneza. Ros. immunol. zhurn. 2015; 9(2): 313–15. (in Russian)]

Новости

Партнеры